روش‌های سنجش به وسیله‌ی مهره‌داران
جنین جوجه
جوجه‌ی یک روزه
جوجه اردک
تست جلدی خرگوش
امتناع از مصرف آب در موش
ماهی
موش‌ها
اسپرماتوزوای گاو نر
دوزیستان
موش صحرایی

مایکوتوکسین‌های مختلف
مایکوتوکسین‌های مختلف
مایکوتوکسین‌های مختلف
ترایکوتسن‌ها
ترایکوتسن‌ها
مایکوتوکسین‌های مختلف
مایکوتوکسین‌های مختلف
ترایکوتسن‌ها
مایکوتوکسین‌های مختلف
مایکوتوکسین‌های مختلف

جهت آنالیز مایکوتوکسین‌ها دو نوع روش الایزا شامل متجانس و نا متجانس وجود دارد(۷۴).
۱-۲۰-۳-۲-۱ روش الایزای متجانس^[۱۲۲]
در این روش آنتی ژن را به فاز جامد متصل کرده و سپس اقدام به شناسایی ایمنی می کند. در این نوع الایزا فعالیت آنزیم پس از اتصال با آنتی بادی اختصاصی تغییر می‌کند، بنابراین جداسازی سم آزاد و متصل به آنزیم کونژوکه که در آزمون ضرورتی ندارد. شناسایی ایمنی نیز به دو صورت مستقیم و غیر مستقیم انجام می‌پذیرد (۵۶).

( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

۱-۲۰-۳-۲-۲ روش الایزای نامتجانس^[۱۲۳]
الایزا نامتجانس (که به آن الایزا فرم ساندویچ نیز می‌گویند) از دو آنتی بادی واکنش‌گر مجزا بر علیه آنتی ژن سود می‌برد. در این روش فعالیت آنزیم بدون تغییر باقی مانده و جداسازی آنزیم متصل و سم آزاد ضروری است. شناسایی ایمنی نظیر آنچه در مورد الایزا متجانس گفته شد، می‌توان به دوصورت مستقیم یا غیر مستقیم باشد(۲۲).
۱-۲۰-۳-۲-۳ محاسن و معایب الایزای متجانس و نامتجانس
یکی از معایب الایزای متجانس نیاز به آنتی ژن نسبتاً خالص جهت انجام این آزمایش است. به عنوان مثال در یک مخلوط، آنتی ژن مورد نظر جهت اتصال به فاز جامد بایستی با سایر آنتی‌ژن‌های موجود به رقابت بپردازد. الایزای متجانس بیشتر جهت شناسایی کیفی آنتی ژن در نمونه مورد نظر به کار می‌رود. الایزای نامتجانس با تخلیص اولیه مولکول مورد نظر و دور نگه داشتن آن از سایر آلوده کننده‌ها بر مشکل خلوص آنتی ژنی غلبه کرده است. این روش نیازمند واکنش‌گرهایی است که قادر به شناسایی حداقل دو اپی توپ مجزای یکی آنتی ژن باشند. استفاده از دو آنتی بادی منوکلونال در الایزای نامتجانس باعث افزایش اختصاصیت آزمون می‌گردد. با این حال معایبی نیز با خود به همراه دارد. کارآیی استفاده از آنتی بادی‌های منوکلونال در مقایسه با آنتی بادی‌های پلی کلونال کمتر است، زیرا آنتی بادی‌ منوکلونال معمولاَ تنها با یک اپی‌توپ آنتی ژن اتصال برقرار می‌کنند(۹۳).
۱-۲۰-۳-۲-۴ روش الایزای مستقیم^[۱۲۴]
در الایزا مستقیم (متجانس و نامتجانس) از آنتی‌بادی‌های نشاندار شده توسط آنزیم جهت شناسایی ایمنی استفاده می‌شود. در این روش استفاده از آنتی‌بادی‌های منوکلونال بر خلاف الایزای غیر مستقیم ضرورت چندانی ندارد، اما نشاندار کردن آنتی بادی منوکلونال مورد استفاده در مرحله شناسایی اجتناب ناپذیر است(۷۴).
۱-۲۰-۳-۲-۵ روش الایزای غیر مستقیم^[۱۲۵]
در الایزای غیر مستقیم (متجانس و نامتجانس) از آنتی گلوبولین‌های نشاندار جهت شناسایی ایمنی استفاده می‌شود. در این روش استفاده از آنتی بادی منوکلونال جهت به دام انداختن آنتی ژن اجتناب‌ناپذیر است(۷۴).
۱-۲۰-۳-۲-۶ روش الایزای رقابتی نامتجانس مستقیم^[۱۲۶]
در این روش، آفلاتوکسین B₁ پس از الحاق به آنزیم به عنوان آنتی‌ژن مورد استفاده قرار می‌گیرد. گوده‌های میکروپلیت پلاستیکی توسط آنتی بادی‌های اخصاصی ضد آفلاتوکسین B₁، پوشیده می‌شود. عصاره با آفلاتوکسن B₁ متصل به آنزیم مخلوط شده و مخلوط حاصله، به گوده‌های پوشیده شده توسط آنتی‌بادی اضافه می‌گردد(۱۸).
آفلاتوکسین موجود در نمونه و آفلاتوکسین B₁ استاندارد متصل به آنزیم جهت اتصال به آنتی‌بادی با هم به رقابت می‌پردازند. آفلاتوکسین‌های آزاد و متصل به آنزیم آزاد پس از شستشو حذف می‌شوند. سوبسترای آنزیمی به تمام گوده‌ها اضافه شده و توسط آنزیم‌های متصل کاتالیز می‌گردد. شدت رنگ ایجاد شده در واکنش، بسته به میزان آفلاتوکسین B₁ الحاقی به آنزیم متصل به آنتی بادی متغیر است. رنگ‌های تیره‌تر بیانگر میزان کمتر آفلاتوکسین آزاد و رنگ‌های روشن تر بیانگر حضور مقادیر بیش‌تر آفلاتوکسین آزاد است.
پس از چند دقیقه تغییر رنگ را می‌توان از طریق مشاهده یا اندازه‌گیری آفلاتوکسین متعاقب افزودن محلول متوقف کننده آنزیمی اندازه گیری کرد(۱۸).
۱-۲۰-۳-۲-۷ روش الایزای غیر رقابتی غیرمستقیم^[۱۲۷]
در این روش از آفلاتوکسین B₁ به عنوان آنتی‌ژن مفروش کننده گوده‌های میکروپلیت استفاده می‌شود. در مرحله بعدی اقدام به افزودن نمونه به گوده‌ها می‌کنند. اساس این مرحله از آزمایش بر مبنای اتصال آنتی‌بادی موجود در نمونه با آنتی ژن چسبیده به ته گوده استوار است. پس از انجام مراحل شستشو، اقدام به افزودن آنتی گلوبولین های متصل به هورس رادیش پراکسیداز^[۱۲۸] (HRP) می‌کنند. پس از چند دقیقه سوبسترای معین جهت ایجاد واکنش رنگی به مجموعه فوق‌الذکر اضافه می‌شود.
اساس این آزمون بر مبنای اتصال آنتی‌گلوبولین متصل به HRP به آنتی‌بادی موجود در نمونه استوار است. میزان آنتی‌بادی موجود در نمونه به شدت رنگ حاصله در آزمون بستگی دارد. این روش برای بررسی حضور آنتی‌بادی‌های ضد آفلاتوکسین در نمونه‌های بیولوژیک نظیر سرم و ادرار استفاده می‌شود(۱۸).
۱-۲۰-۳-۲-۸ روش الایزای غیر رقابتی مستقیم^[۱۲۹]
الایزا غیر رقابتی مستقیم نظیر آن چیزی است که شرح آن در مورد الایزای غیر رقابتی غیرمستقیم گفته شد. تنها تفاوت در استفاده از آنتی‌بادی متصل به HRP به جای آنتی گلوبولین متصل به HRP است(۱۸و۷۴).
فصل دوم
مواد و روش کار
۲-۱مواد و وسایل مورد نیاز
محلول متانول ۸۰ درصد
ترازوی دیجیتال
کیسه های پلاستیک مناسب برای حمل نمونه (‌کنسانتره)